د هیموګلوبین الکتروفورسیس تجربه

د تجربې اصول

د هیموګلوبین الکتروفورسیس هدف د مختلف نورمال او غیر معمولي هیموګلوبینونو کشف او تایید کول دي.

د مختلف هیموګلوبین ډولونو د مختلف چارجونو او اسو الیکټریک نقطو له امله، په یو ځانګړي pH بفر محلول کې، کله چې د هیموګلوبین isoelectric نقطه د بفر محلول pH څخه ټیټه وي، هیموګلوبین یو منفي چارج لري او د الیکٹروفورسیس په وخت کې د انود په لور حرکت کوي. برعکس، هیموګلوبین د مثبت چارج سره د کیتوډ په لور حرکت کوي.

د یو ټاکلي ولتاژ لاندې او د یو ځانګړي الیکٹروفورسس وخت وروسته، هیموګلوبین د مختلف چارجونو او مالیکولر وزنونو سره د مهاجرت مختلف لارښوونې او سرعتونه ښیې. دا د جلا زونونو جلا کولو ته اجازه ورکوي، او د مختلف هیموګلوبینونو اندازه کولو لپاره په دې زونونو کې د رنګ میټریک یا الکتروفوریتیک سکینګ تحلیل ترسره کیدی شي. ترټولو عام کارول شوی میتود pH 8.6 سیلولوز اسټیټ جھلی الیکٹروفورسیس دی.

د سایتوپلازم دننه، د ایتیلین ګلایکول ګروپونه (CHOH-CHOH) په ګلایکوجن یا پولیساکریډ موادو کې شتون لري (لکه میوکوپولیساکریډز، میوکوپروټینز، ګلیکوپروټینز، ګلایکولیپیډز، او نور) د دوراني اسید پواسطه اکسیډیز کیږي او په الډیهایډ ګروپونو (CHOH-CHOH) بدلیږي. دا الډیهایډ ګروپونه د بې رنګ ارغواني - سور شیف ریجنټ سره یوځای کیږي ، یو ارغواني - سور رنګ رامینځته کوي چې په حجره کې د پولی سیکرایډونو شتون لري. دا عکس العمل د دوراني اسید - شیف (PAS) داغ په نوم پیژندل کیږي ، چې پخوا د ګلایکوجن داغ په نوم یادیږي.

د تجربې طریقه

مواد:سیلولوز اسټیټیادbrane، electrophoresis اپریټس(DYCP-38C او د بریښنا رسولو DYY-6C), د غوره نمونې بارولو وسیله (پایپټ), spectrophotometer , colorimetric cuvettes, بفر

بفر:

(1) pH 8.6 TEB بفر: وزن 10.29 g Tris، 0.6 g EDTA، 3.2 g بوریک اسید، او په 1000 ملی لیتر کې منحل شوي اوبه اضافه کړئ.

(2) بورایټ بفر: وزن 6.87 ګرام بوریکس او 5.56 ګرام بوریک اسید، او په 1000 ملی لیترو کې منحل شوي اوبه اضافه کړئ.

کړنلاره:

Pد هیموګلوبین محلول ترمیم

3 ملی لیتر وینه واخلئ چې هیپرین یا سوډیم سیټریټ لري د انټي کوګولینټ په توګه. د 10 دقیقو لپاره په 2000 rpm کې سینټرفیوج کړئ او پلازما پریږدئ. د وینې سره حجرې درې ځله د فیزولوژیکي مالګین سره ومینځئ (750 rpm، هر ځل 5 دقیقې سینټرفیوګریشن). د 10 دقیقو لپاره په 2200 rpm کې سینټریفیوج کړئ او سپرناټینټ پریږدئ. په مساوي اندازه منحل شوي اوبه اضافه کړئ، بیا د کاربن ټیتراکلورایډ حجم 0.5 ځله اضافه کړئ. د 5 دقیقو لپاره په زور سره وخورئ، او بیا په 2200 rpm کې د 10 دقیقو لپاره سینټرفیوج کړئ ترڅو د وروسته کارولو لپاره د پورتنۍ Hb محلول راټول کړئ.

د غشا لندبل

د سیلولوز اسټیټ جھلی د 3 سانتي مترو × 8 سانتي مترو په اندازه پټو کې پرې کړئ. دوی په pH 8.6 TEB بفر کې تر هغه پورې ډوب کړئ تر څو چې په بشپړ ډول سینګار شوي وي، بیا د فلټر کاغذ سره لیرې او وچ کړئ.

ځړول

د 10 μl هیموګلوبین محلول په عمودي توګه د سیلولوز اسټیټ جھلی (د ناڅاپه اړخ) د څنډې څخه شاوخوا 1.5 سانتي مترو ته د ځای په ځای کولو لپاره د پایپټ څخه کار واخلئ.

الکتروفورسیس

د بوریټ بفر محلول د الکتروفورسیس چیمبر ته واچوئ. د سیلولوز اسټیټ جھلی د چیمبر په پای کې د کیتوډ په پای کې د داغ شوي اړخ سره ځای په ځای کړئ. د 30 دقیقو لپاره په 200 V کې چل کړئ.

Elution

د HbA او HbA2 زونونه پرې کړئ، په جلا ټیسټ ټیوبونو کې یې ځای په ځای کړئ، او په ترتیب سره 15 ملی لیتر او 3 ملی لیتر اوبه اضافه کړئ. په نرمۍ سره وخورئ ترڅو هیموګلوبین په بشپړ ډول له مینځه ویسي، بیا مخلوط کړئ.

د رنګونو اندازه

د ایولوشن محلول لپاره د تشو اوبو په کارولو سره جاذبه صفر کړئ او جاذبه په 415 nm اندازه کړئ.

محاسبه

HbA2(%) = د HbA2 ټیوب جذب / (د HbA ټیوب جذب × 5 + د HbA2 ټیوب جذب) × 100٪

د تجربوي پایلو محاسبه

د pH 8.6 TEB بفر سیلولوز اسټیټ الیکټروفورسیس لپاره د حوالې حد: HbA > 95%, HbA2 1%-3.1%

یادښتونه

د الکتروفورسیس وخت باید ډیر اوږد نه وي. د سیلولوز اسټیټ جھلی باید د الکتروفورسیس په جریان کې وچ نشي. کله چې HbA او HbA2 په روښانه ډول سره جلا شوي وي الکتروفوریسس بند کړئ. اوږدمهاله الکتروفورسیس کولی شي د بند د خپریدو او تیاره کیدو لامل شي.

د ډیرو نمونو کارولو څخه ډډه وکړئ. د هیموګلوبین ډیر مایع کولی شي د بند جلا کیدو یا ناکافي داغ کیدو لامل شي ، چې په پایله کې یې د HbA کچه غلطه لوړه شوې.

د پروټینونو سره د سیلولوز اسټیټ جھلی د ککړتیا مخه ونیسئ.

جریان باید ډیر لوړ نه وي؛ که نه نو، د هیموګلوبین بانډونه ممکن جلا نشي.

تل د نورمال اشخاصو نمونې او اړین پیژندل شوي غیر معمولي هیموګلوبین د کنټرول په توګه شامل کړئ.

د بیجینګ لیویی بایو ټیکنالوژي د هیموګلوبین الیکٹروفورسیس لپاره مسلکي الیکټروفوریسس ټانک تولیدوي چې ماډل دیDYCP-38Cد سیلولوز اسټیټ جھلی الیکٹروفورسیس ټانک ، او د سیلولوز اسیټیټ جھلی الیکٹروفورسیس ټانک لپاره د بریښنایی اکمالاتو دوه ماډلونه شتون لريDYY-2CاوDYY-6Cد بریښنا رسول.

په ورته وخت کې ، د بیجینګ لیویی بایو ټیکنالوژي د پیرودونکو لپاره د سیلولوز اسټیټ جھلی چمتو کوي ، او د سیلولوز اسټیټ جھلی اندازه تنظیم کیدی شي. ښه راغلاست له موږ څخه د نمونو او نورو معلوماتو غوښتنه وکړئ.

د بیجینګ لیویی برانډ په چین کې له 50 کلونو څخه ډیر تاریخ لري او شرکت کولی شي په ټوله نړۍ کې باثباته او لوړ کیفیت لرونکي محصولات چمتو کړي. د کلونو پراختیا له لارې، دا ستاسو د انتخاب وړ دی!

موږ اوس د شریکانو په لټه کې یو، د OEM الکتروفوریسس ټانک او توزیع کونکي هرکلۍ کیږي.

که تاسو زموږ د محصولاتو لپاره کوم پیرود پلان لرئ، مهرباني وکړئ له موږ سره اړیکه ونیسئ. تاسو کولی شئ موږ ته په بریښنالیک پیغام واستوئ[د بریښنالیک خوندي]یا[د بریښنالیک خوندي]، یا مهرباني وکړئ موږ ته په +86 15810650221 کې زنګ ووهئ یا واټس اپ + 86 15810650221 اضافه کړئ ، یا ویچټ: 15810650221